生物素标记多肽
多肽亲和纯化、免疫组化 (IHC)、细胞表面标记、流式细胞术/荧光激活细胞分类(FACS)。
北科纳米提供生物素标记肽合成服务。通常，生物素可被标记在N端或C端(经由Lys)。我们推荐N端标记，其标记的成
功率更高，所需时间更短，操作更简洁。
生物素可通过各种不同的linker或spacers与多肽隔离。一般建议引入间隔器如Ahx（一个6碳链接器)让生物素更稳定
或更灵活。
北科纳米提供N端或C端生物素标记：Biotin (N terminus), Lys(Biotin)(middle), Lys(Biotin)(C terminus)。
带有linker(Ahx)的生物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)。
生物素标记肽的Pull-down实验方案分析
生物素标记肽可与亲和素磁珠共轭以生成树脂，用于肽pulldown试验。先把生物素标记肽上样至Immobilized
streptavidin beads (Pierce) 锚定有亲和素的磁珠上，再与细胞裂解液孵育。细胞裂解于1％（v/v）Nonidet P-40,
150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche Applied
Science), 加入 1 mM sodium orthovanadate作为磷酸酶抑制剂。等量的蛋白质分别与被锚定的多肽在4℃孵育6
小时。经过大量洗涤，在SDS样品buffer中煮沸，结合蛋白可从被锚定的多肽洗脱下来，或者，用50 mM
dithiothreitol将多肽与蛋白复合物从磁珠中断开。将来自活性肽和对照目标肽pull-downs的洗脱液合并，以作进一
步的分析。
上图为链霉亲和素-生物素键力测量示意图。由于它们异常高的亲和结合性，其中*突出的配体-受体对是链霉
亲和素-生物素（streptavidin-biotin）和亲和素-生物素（avidin-biotin）。 这两种蛋白质都有一个四聚体的结构，
这样他们可以结合4个配体。
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