水凝胶：多孔GelMA
| 【编号】BK2020121707 | 【CAS号】cas | ||
| 【货号】BK2020121707-02 | 【规格】 | ||
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本说明书仅作参考，用户可根据实际情况进行适当调整。
产品组分
组分：多孔 GelMA
质量：0.6gX2
储存及运输
干态:-20℃避光.6个月,可常温运输。溶液:4℃避光,7天;-20℃避光.3个月;溶液反复冻融会影响产品性能,尽量现配现用。
有效日期
生产日期见包装。
所需材料GM-PR系列多孔 GelMA水凝胶产品
PBS（1X)
恒温磁力搅拌水浴锅0.22 um无菌针头过滤器
10-50 mL无菌离心管
10 mL注射器
1-5 mL移液枪及枪头
LS-1601 系列405nm化平源
操作步骤
| 步骤 | 名称 | 材料 |
过程 |
| 1 | 溶液配制 |
GM-PR系列多孔 GellMA 1)向多孔 GelM PBS (1X) 移液枪 恒温水浴磁力搅拌器 |
1)向多孔 GelMA包装瓶中加入10 mL PBS;(瓶内含磁力转子、0.6g多孔 GelMA产品) 2）37℃避光水浴磁力搅拌1h(重要步骤〕制备多孔 GelMA水凝胶前驱体溶液。 |
| 2 | 溶液除菌 |
0.22 um无菌针头过滤器 恒温水浴锅 无菌离心管 |
1将上述溶液立即使用0.22 um无菌针头过滤器除菌(防止降温凝胶化)．37℃避光保温备用。注:如无法一次用完可于冰箱冷藏短期保存(<7 day)。下次使用前于37℃复溶.并振荡20-30s使材料均匀。 |
| 3 | 混合细胞 |
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1收集细胞; 2用无菌前驱体溶液重悬细胞〔多次吹打或振荡}。
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| 4 | 凝胶固化 |
移液枪及枪头 LS-1601系列固化光源 |
1将前驱体溶液加入孔板;96孔板:50~100 uL/孔，48孔板:100~300uL孔，24孔板:300-500 uL/孔 2室温静置2min; 3以LS-1601系列405nm光源贴近孔板辐照10-20以固化水凝胶。 注:GM-PR-001辐照时间~175s GM-PR-002辐照时间~15s |
| 5 | 清洗样品 | 移液枪及枪头 |
1）加入培养基，置于37度培养箱中5分钟 2）吸去培养基 |
| 6 | 细胞培养 |
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根据实验设计进行培养基更换、观察拍照等操作 |
操作步骤（2D细胞培养）
多孔 GelMA水凝胶2D细胞培养操作步骤与3D培养主要步骤一致，只是省去了步骤3混合细胞。步骤6清洗样品完成后即可进行细胞表面种植。
温馨提示：请勿直视固化光源
虽然水凝胶内部也自带孔隙结构，但其孔隙过小，使得包裹细胞进行三维培养及生物3D打印时内部的养物质传输及细胞代谢废物排出不畅，致密的孔隙阻碍了细胞更好的功能化。为了提高水凝胶内细胞与外界的物质交换效率，并为细胞生长增殖提供更多空间，团队持续攻关，成功研制出了高孔隙率GelMA水凝胶
获得数十乃至数百微米孔隙结构，常规做法是通过乳液造孔获得，这些工艺存在稳定性差、操作复杂等缺点。BKNM-GM-PR系列通过材料学颠覆性的设计，其使用体验与常规GelMA材料无任何区别，只需要溶解、光照固化即可轻松获得数百微米孔隙结构水凝胶（图1）。
图1 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶操作流程
01 微观形貌
BKNM-GM-PR系列具有几微米至几百微米的孔道结构以适应不同应用需求。通常三维细胞培养时需要50微米以上的孔隙结构，大的孔隙结构可为细胞提供高效的物质交换通道，也为细胞增殖、生长提供空间，能显著提高细胞的增殖活性。（图2）
图2 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶可控微观孔道结构的激光共聚焦照片
02 细胞培养
BKNM-GM-PR系列多孔水凝胶在细胞培养方面具有优异的性能，通过与GelMA无孔水凝胶对比可以明显看出多孔GelMA水凝胶的优势。两种配方的多孔GelMA水凝胶其内部细胞增殖速率均高于GelMA无孔水凝胶，在培养第7天时出现了数倍的细胞数量差。（图3）
图3 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶内部细胞增殖荧光照片及定量分析
在凝胶表面进行细胞培养时，多孔GelMA同样具有优秀表现，贯通的孔道结构使接种在表面的细胞呈现向凝胶内部迁移的趋势，第9天细胞迁移深度可达约540μm。（图4）
图4BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶表面细胞培养荧光照片（红色为荧光GelMA）
03 水凝胶培养过程稳定性
多孔结构水凝胶其比表面积远大于普通无孔水凝胶，因此，多孔水凝胶在相同基体凝胶强度条件通常比无孔水凝胶降解更快。为了支持长时间的细胞培养，EFL团队通过优化配方，在实现优异细胞增殖性能的同时赋予多孔水凝胶良好的稳定性。通过与普通GelMA无孔水凝胶对比，BKNM-GM-PR系列多孔水凝胶在细胞增殖及凝胶稳定性方面均有更好的表现。（图5）
图5 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶培养过程稳定性测试数码照片及细胞荧光照片
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