重组蛋白A琼脂糖凝胶FF重力预装柱
| 【编号】BK-NRPB01S | 【CAS号】CAS | ||
| 【货号】BK-NRPB01S-Z25 | 【规格】 | ||
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品 名： 重组蛋白A琼脂糖凝胶FF
英文名： Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF
目录号： NRPB01L、NRPB01S(预装柱)
规 格： 20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格订制
运 输： 2 ~ 25℃，常压、避光
贮 存： 20%乙醇，2 ~ 8℃
保质期： 3 年
相关介绍：
蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，包含有5个区域，可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基，蛋白A能够比较紧密地偶联到NUPharose上，使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。
技术指标：
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基质 |
4%高度交联琼脂糖凝胶 |
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配基 |
重组蛋白A |
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配基密度 |
≥ 6 mg/ml |
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填料粒径 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推荐流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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pH稳定性 |
pH 3 ~ 9 |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
≥40 mg/ml IgG |
抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：
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种类 Species |
亚型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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马 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
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兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
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猪Pig |
IgG |
+++ |
+ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
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鸡Chicken |
IgY |
- |
- |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0
1)1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；
7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
图 1
注意事项：
1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
4)通常（每次）目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。
5)使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。
6)
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推荐流速 |
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预装柱体积（ml） |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml/min) |
0.2 |
1 |
2 |
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